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檢測前 水樣預處理相關
1.含有余氯水樣在進行大腸菌群指標檢測前是否需要進行預處理？
答：需要。
余氯包括游離性余氯和化合性余氯。游離性余氯（HClO、ClO?、Cl?）與化合性余氯（NH?Cl、NHCl?）能快速破壞細菌的細胞壁、細胞膜，氧化細菌內部的酶和遺傳物質，導致細菌死亡。如果對含余氯水樣不進行預處理，水樣中的大腸菌群可能部分被殺滅、導致檢測結果偏低。
表1 余氯預處理相關標準
針對含余氯水樣，可選用泰林無菌取水袋或無菌取樣瓶，兩類產(chǎn)品均按照 GB/T 5750.2-2023《生活飲用水標準檢驗方法 第 2 部分：水樣的采集與保存》的相關要求添加硫代硫酸鈉，可有效去除水樣中的余氯。若使用泰林未添加硫代硫酸鈉的無菌取水袋、無菌取樣瓶，建議對含余氯水樣先行預處理。
2.重金屬離子含量高的水樣為什么要進行預處理？
重金屬離子會改變酶底物試劑體系的離子強度與pH值，直接抑制目標微生物體內酶的活性，導致其無法與酶底物充分反應。部分重金屬離子與顯色劑或反應產(chǎn)物結合，產(chǎn)生沉淀影響判讀，造成檢測結果偏低。
根據(jù)HJ 1001-2018《水質 總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定 酶底物法》與HJ 347.2-2018《水質 糞大腸菌群的測定 多管發(fā)酵法》規(guī)定：如果采集的是重金屬離子含量高的水樣，應在每100mL水樣中添加0.036g乙二胺四乙酸二鈉。
小貼士
環(huán)境水樣中北方地區(qū)干旱降雨少，且廣泛分布石灰?guī)r、白云巖、富鈣黃土等，礦物質易被水溶解，導致水樣中重金屬離子含量偏高。南方地區(qū)濕潤多雨，且主要分布火成巖（花崗巖等）、變質巖等，礦物質不易溶解，水體重金屬離子含量偏低。
地下水因漫長滲透過程，能夠充分溶解地層（如石灰?guī)r、石膏）中的金屬離子，地下水的重金屬含量普遍高于地表水。
泰林酶底物法大腸菌群檢測試劑復配多種成分，能夠緩沖重金屬離子的沖擊，各組分與重金屬離子不會發(fā)生理化反應。經(jīng)質控菌株與水樣檢測驗證，使用泰林的耗材與酶底物法大腸菌群檢測試劑，不需對重金屬離子含量高的水樣額外進行預處理。
檢測中 實驗過程與培養(yǎng)相關
1.酶底物法大腸菌群檢測出現(xiàn)淺色孔的原因、處理方法與檢測結果判讀？
答：酶底物法大腸菌群檢測出現(xiàn)淺色孔的原因有：
1）水體中的部分大腸菌群自身生長慢、產(chǎn)酶少。
2）環(huán)境壓力造成部分大腸菌群菌體處于損傷狀態(tài)。
根據(jù)GB/T 5750.12-2023 《生活飲用水標準檢驗方法 第12部分：微生物指標》總大腸菌群檢測酶底物法規(guī)定：如果結果為可疑陽性，可延長培養(yǎng)時間到28h進行結果判讀。
培養(yǎng)時間小于 24h出現(xiàn)的陽性結果視作有效，培養(yǎng)時間高于28h的陰性結果也視為有效。
24-28h內出現(xiàn)的結果變化以 28h最終結果為有效結果，28h后出現(xiàn)的結果變化均視為無效。
2. 酶底物法大腸菌群檢測出現(xiàn)可疑陽性孔、為什么可以延長培養(yǎng)時間至28h觀察結果？
答：延長培養(yǎng)時間至28h，是對24h可疑陽性結果的補充確認。如果24h已出現(xiàn)明確陽性，則不需延長培養(yǎng)。只有存在難以辨認的可疑陽性結果，需延長培養(yǎng)時間至28h。
對大腸菌群：28h是一個經(jīng)過驗證的、能充分促進絕大多數(shù)受到環(huán)境壓力而菌體損傷的大腸菌群恢復的窗口期。
對于非大腸菌群：28h是一個安全邊界，可以確保抑菌成分的有效性，最大限度地防止非大腸菌群的生長，從而保證方法的高特異性。
3. 為什么糞大腸菌群檢測時，定量盤中會出現(xiàn)漸變黃色？
答：因為培養(yǎng)箱加熱方式、定量盤擺放與堆疊方式造成定量盤受熱不均，影響糞大腸菌群的生長。
定量盤擺放與堆疊方式造成箱體內熱傳遞更慢，熱分布更不均勻。糞大腸菌群作為溫度敏感型細菌，在溫度低的一側生長產(chǎn)酶變色，在溫度高的一側（如超出了44.5 ± 0.5℃的上限），生長被抑制，出現(xiàn)如下圖所示的漸變色。
當定量盤出現(xiàn)漸變黃色，應立刻依據(jù)GB/T 10592-2023 《高低溫試驗箱技術條件》與GB/T 28851-2012 《生化培養(yǎng)箱技術條件》相關標準進行培養(yǎng)箱溫度驗證。根據(jù)驗證結果，采用JJF 1101-2019 《環(huán)境試驗設備溫度、濕度參數(shù)校準規(guī)范》與《培養(yǎng)箱使用說明書》進行溫度調節(jié)。保證培養(yǎng)溫度符合檢測條件。
建議糞大腸菌群檢測時，使用隔水式培養(yǎng)箱，定期進行溫度驗證，將定量盤置于培養(yǎng)箱中央，且定量盤堆疊不超過5個，每疊定量盤之間至少間隔5cm。
檢測后 廢棄物處理相關
1. 酶底物法微生物檢測培養(yǎng)后的定量盤如何處理？
答：培養(yǎng)后的定量盤經(jīng)121℃、高壓蒸汽滅菌20min后，作為一般廢棄物處理。
1）培養(yǎng)后的定量盤置于專用的廢棄物容器內，集中存放在指定地點。
2）培養(yǎng)后的定量盤每20個放入雙層生物安全滅菌袋中，袋口打結。
3）放入滅菌鍋經(jīng)121℃、高壓蒸汽滅菌20min處理后，作為一般廢棄物處理。
集中存放→雙層生物安全滅菌袋→121°C、高壓蒸汽滅菌20min
依據(jù)GB 19489-2008 《實驗室生物安全通用要求》；SN/T 4835-2017 《實驗室生物廢棄物管理要求》；HJ 1001-2018 《水質 總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定 酶底物法》相關規(guī)定。