除了個(gè)別在PAGE膠上利用熒光或者酶活性直接做類(lèi)似Western反應(yīng)的“前衛(wèi)”方法，印跡法的常規(guī)主流，無(wú)論是Southern、Northern還是Western Blot，都需要將電泳結(jié)果轉(zhuǎn)印到膜上固定，再進(jìn)行顯色顯影反應(yīng)。對(duì)于各種Blot來(lái)說(shuō)，作為承載實(shí)驗(yàn)結(jié)果的載體，包括各類(lèi)斑點(diǎn)雜交或者克隆轉(zhuǎn)印，膜的選擇就顯得很重要。
德國(guó)老牌的廠(chǎng)家Schleicher & Schuell是世界*個(gè)生產(chǎn)硝酸纖維素膜的廠(chǎng)家，其產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)即為同類(lèi)產(chǎn)品的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品質(zhì)量毋庸置疑，去年被對(duì)手之一的Whatman收購(gòu)而成為Whatman旗下產(chǎn)品。不過(guò)由于這個(gè)牌子的產(chǎn)品品種頗多，初次選擇時(shí)不免讓人眼花繚亂，上海力敏小編在這里特別介紹一下，便于大家選擇。
PVDF膜
Westran S：很高的蛋白質(zhì)結(jié)合效率和載量，即使很劇烈的反復(fù)洗滌條件也不影響目標(biāo)蛋白結(jié)合。0.2μm小孔徑，防蛋白質(zhì)滲漏。zui重要的是，PVDF膜化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，可以兼容測(cè)序----將蛋白條帶剪下可以直接去N端測(cè)序。如果需要做蛋白質(zhì)測(cè)序，PVDF是*選擇。
Westran Clear Signal：和小S的區(qū)別是孔徑，這個(gè)是0.45μm，其他特性一樣，專(zhuān)為蛋白質(zhì)Western用的。由于孔徑大，轉(zhuǎn)移速度也比較快，截留的背景更少，信號(hào)就更清晰。CS可以兼容常規(guī)的蛋白燃料，比如麗春紅，氨基黑，靠馬斯亮藍(lán)染色。
PVDF膜用前需要“飄在”甲醇液面浸潤(rùn)（通風(fēng)櫥操作），然后才能進(jìn)行下一步。轉(zhuǎn)移方法適用于半干轉(zhuǎn)或者電轉(zhuǎn)，其他不適合。而固定的方法主要采用干燥固定。顯色，包括化學(xué)發(fā)光法和同位素，化學(xué)顯色法，都適合PVDF膜。
硝酸纖維素膜：
Protran：純的硝酸纖維素膜。在所有膜中，Protran膜的封閉zui簡(jiǎn)單容易，從而可有效阻斷非特異結(jié)合，降低背景，無(wú)需嚴(yán)謹(jǐn)清洗即可得到良好的信噪比；廣泛適用于同位素、化學(xué)發(fā)光法、顯色法和熒光法等不同的標(biāo)記顯色方法，適用于包括Southern，Northern，Western Blot在內(nèi)的多種實(shí)驗(yàn)。對(duì)于基于HRP的化學(xué)發(fā)光法印跡反應(yīng)，效果尤佳。不過(guò)，由于是純硝酸纖維素膜，比較脆，操作上要特別注意。Protran孔徑分為0.45μm；0.2μm；0.1μm這3種。0.45μm膜通常適用于分子量大于20KD的蛋白分子和300bp以上大小的核酸；而0.2μm膜則由于密度大孔徑小能有效減少“滲漏”，更適用于分子量小于20KD的蛋白質(zhì)分子，包括300bp以下的短鏈DNA或者寡核苷酸。而0.1μm膜則是用來(lái)對(duì)付7KD以下的蛋白質(zhì)小家伙們的。如果你的實(shí)驗(yàn)中的小分子蛋白質(zhì)Western Blot老做不好（比如EGF），大概有可能就是膜的孔徑不夠小，漏掉拉（當(dāng)然電泳Buffer不用甘氨酸也是竅門(mén)之一）。硝酸纖維素膜不需要甲醇預(yù)先浸潤(rùn)，用前直接鋪在在水面滲透潤(rùn)濕后就可以使用。Protran的另外一個(gè)小小優(yōu)點(diǎn)是非常穩(wěn)定，5年前保存Western Blot的實(shí)驗(yàn)結(jié)果在歷時(shí)5年后再次做顯色反應(yīng)，依然能正確顯色。雖說(shuō)需要重復(fù)用到5年前結(jié)果的，好像很少見(jiàn)，但能說(shuō)明其性質(zhì)穩(wěn)定，可保存蛋白質(zhì)。
在操作上，除了小心之外，Protran硝酸纖維素膜適用于常規(guī)電轉(zhuǎn)、半干轉(zhuǎn)、真空轉(zhuǎn)、毛細(xì)轉(zhuǎn)移，但不適合用堿法。固定方法，如果樣本是核酸，可以用紫外交聯(lián)或者80度烘干固定，蛋白質(zhì)則只需要干燥固定即可。Protran適用于各種通用的顯色方法如化學(xué)顯色，化學(xué)發(fā)光，同位素和熒光法。
Optitran：夾心的硝酸纖維素膜，中間的聚酯基質(zhì)兩面均勻覆蓋硝酸纖維素，使得該種膜具有硝酸纖維素膜的所有優(yōu)點(diǎn)同時(shí)兼具強(qiáng)韌性，特別適合需要反復(fù)操作的實(shí)驗(yàn)，比如需要多次重復(fù)標(biāo)記雜交和重復(fù)洗脫的實(shí)驗(yàn)----有時(shí)候?qū)ν粋€(gè)電泳結(jié)果需要Western檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)蛋白，在檢測(cè)*個(gè)目標(biāo)蛋白后，可用酸洗（如0.2MGlycine/0.5MNaCl,pH2.8）2-5min，Tris中和，從而洗脫*個(gè)目標(biāo)蛋白抗體，再進(jìn)行第二個(gè)目標(biāo)抗體的檢測(cè)，Optitran的強(qiáng)韌的高耐受性正好適合這類(lèi)重復(fù)操作的要求。Optitran膜0.45μm和0.2μm兩種孔徑規(guī)格提供，除了單位面積zui大載量相對(duì)Protran會(huì)小一些，其他選擇和使用和Protran都是一樣的。Optitran由于帶有聚酯，通常不推薦用熒光檢測(cè)。
尼龍膜
Nytran SuPerCharge：帶高正電荷的尼龍膜。尼龍膜柔軟，強(qiáng)韌，耐折疊，可耐受強(qiáng)度較高的機(jī)械操作，這一點(diǎn)上遠(yuǎn)勝于硝酸纖維素膜，并因而廣泛用于膜芯片，Macroarray，或者預(yù)制核酸雜交膜上。通常核酸分子在電泳條件下是帶負(fù)電，尼龍膜上電荷越高，吸附帶負(fù)電的核酸分子的能力越強(qiáng)，不過(guò)蛋白質(zhì)荷電特性與核酸不同，尼龍膜更常見(jiàn)用于Southern或者Northern。Nytran SuPerCharge經(jīng)過(guò)特殊處理，均勻附著在中間介質(zhì)兩面，表面孔徑均一，電荷量是常規(guī)帶正電核酸膜的3倍，對(duì)核酸的吸附更強(qiáng)，更重要的是經(jīng)過(guò)特殊處理，克服以往帶電尼龍膜背景高的弱點(diǎn)，能得到良好的信噪比。
尼龍膜適用于各種轉(zhuǎn)移方法，如電轉(zhuǎn)，半干轉(zhuǎn)，毛細(xì)管，堿法等，固定方法是紫外交聯(lián)。不過(guò)就不太適合化學(xué)顯色和熒光檢測(cè)。因?yàn)槟猃埍旧碛袩晒?，?huì)干擾結(jié)果；而化學(xué)顯色劑的微小顆粒容易附著而產(chǎn)生斑點(diǎn)背景。
Nytran同樣分0.45μm和0.2μm孔徑，分別適合300bp以上或者以下的核酸片段。選擇的標(biāo)準(zhǔn)是看你的核酸大小。
Nytran N是常規(guī)帶正等電荷的尼龍膜。除了荷電小其他特性和差不多，如果你不想要高電荷，這個(gè)就是一選擇。
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